小鼠牙乳头来源MDPC-23细胞自发形成的类破牙细胞鉴定

• 作者: 任晶 李琛 田俊 祁文婷 蒋宏伟
• 来源期刊: 中华口腔医学研究杂志（电子版）
• 关键词: 牙根吸收 破牙细胞 MDPC-23细胞 破牙细胞分化
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 349-356
• 页数: 8页
• 字数: 5513字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.05.001

摘要

目的：探寻小鼠牙乳头来源MDPC?23细胞自发形成的体外破牙细胞的培养方法。方法 MDPC?23细胞常规培养6 d，利用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法与RANKL诱导RAW 264.7细胞形成的破骨细胞相比较；金相显微镜及扫描电镜（SEM）观察牙本质片上细胞形态及吸收陷窝形成情况；免疫荧光染色观察丝状肌动蛋白（F?actin）细胞骨架结构；免疫印迹、免疫荧光和（或） ELISA法检测破牙细胞形成相关蛋白RANKL、RANK、TRAF6以及破牙细胞标志蛋白TRAP、组织蛋白酶K（Cathepsin K）的表达情况。Cathepsin K和TRAP蛋白表达的灰度值比较采用两独立样本的t检验进行统计；0、2、4、6 d四个时间点RANKL分泌水平的比较采用方差分析进行统计分析。结果MDPC?23细胞常规培养6 d可自发形成少量TRAP染色阳性的多核巨细胞，其形态有别于RAW 264.7细胞形成的破骨细胞；自发形成的多核巨细胞仅能在牙本质片上形成少量较浅的吸收陷窝；免疫荧光结果显示，自发形成的类破牙细胞具有破牙细胞特征性丝状肌动蛋白环结构；免疫印迹、免疫荧光和（或）ELISA结果表明，MDPC?23细胞体外常规培养下表达RANK、TRAF6蛋白并自分泌RANKL，第0、2、4、6天RANKL分泌水平总体差异有统计学意义（F=5.373，P=0.026），第2天RANKL分泌水平较第0天增加（P=0.007）；第6天TRAP及Cathepsin K蛋白表达上调（tTRAP=5.033，PTRAP=0.0024；tCathepsin K=12.95，PCathepsin K=0.0002）。结论 MDPC?23细胞体外常规培养下可自发形成少量吸收能力较弱的TRAP染色阳性的多核巨细胞，具有特征性肌动蛋白环结构，同时能上调破牙细胞特征性蛋白TRAP和Cathepsin K表达，自分泌RANKL并表达RANK、TRAF6蛋白，是与成熟破牙细胞形态、结构及蛋白表达相似的类破牙细胞。