脂质体介导遗传转化双孢蘑菇菌褶及1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(ACO)功能初探

• 作者: 刘冬忍 张岩 张朝辉 王小飞 王景冒 邱立友
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 脂质体介导转化 双孢蘑菇 菌褶 RNA干扰(RNAi) 1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(ACO)
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1112-1120
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.08.015

摘要

本研究旨在建立一种高效的双孢蘑菇(Agaricus bisporus)遗传转化方法,并以此方法构建双孢蘑菇1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase,ACO)的RNAi突变株,研究该基因的功能,探索双孢蘑菇的乙烯生物合成途径.将脂质体和构建的双孢蘑菇ACO部分编码区序列的双链RNA表达质粒pBHg-dsACO按1μL∶2.5 μg混匀后稀释1 000倍,与幼嫩双孢蘑菇子实体的菌褶组织细块(长约4 mm)在室温下共培养100 min,然后在再生培养基(regeneration complete medium,RCM)平板中25℃培养7d左右,挑取萌发的组织块移植于含潮霉素的PDA平板中进行筛选和继代培养,再经PCR鉴定获得转化子.结果表明,构建的双孢蘑菇ACO基因RNAi转化子遗传稳定,ACO基因表达量比出发菌株降低47％～74％(P＜0.01),ACO酶活力和乙烯产量分别降低68％～86％和27％～48％(P＜0.05),表明双孢蘑菇具有和高等植物相同的合成乙烯的ACC途径.本研究结果提示,脂质体介导转化双孢蘑菇菌褶方法简便高效,为双孢蘑菇的遗传改良提供了新的高效分子生物学手段.