流感病毒两种反向遗传学操作系统的初步构建

• 作者: 丁小满 刘慧 彭博 房师松 武伟华 王昕 董方圆 连孟洋 郑青
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: RNA聚合酶Ⅰ 反向遗传学 绿色荧光蛋白 转染
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 432-436
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 字数: 3551字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.05.009

摘要

目的 构建依赖辅助病毒和宿主细胞内合成病毒核糖核蛋白复合体(vRNPs)的反向遗传学系统,利用上述两系统表达绿色荧光蛋白(EGFP).方法 将EGFP cDNA精确插入人RNA聚合酶Ⅰ启动子和小鼠终止子序列之间,构建RNAPOLI系统,此系统被克隆入pBluescript Ⅱ sk(+),获得重组质粒pBluescript Ⅱ sk(+)tI-EGFP-PIh;基于辅助病毒H1N1,pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh转染MDCK细胞,观察荧光.来源于甲型流感病毒H1N1分离株A/Puerto Rico/8/34的PB2、PB1、PA、NP 4个基因片段cDNA克隆入载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,将pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh与4个表达质粒共转染293T细胞,观察荧光.结果 所构建的载体均经菌液PCR及测序验证正确;两种转染体系均可观察到绿色荧光.结论 所构建的依赖辅助病毒和宿主细胞内合成vRNPs的反向遗传学系统均可使绿色荧光蛋白表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑青	暨南大学药学院	67	505	12.0	19.0
2	房师松		91	425	12.0	16.0
3	王昕		51	166	9.0	11.0
4	武伟华		22	30	3.0	5.0
5	连孟洋	暨南大学药学院	2	3	1.0	1.0
6	彭博		20	21	2.0	4.0
7	刘慧		15	10	2.0	2.0
8	董方圆	暨南大学药学院	4	8	2.0	2.0
9	丁小满	中山大学公共卫生学院	6	26	3.0	5.0