马铃薯T-DNA插入拷贝数的检测及对农艺性状的影响研究

• 作者: 杨永智 王舰 石建斌
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马铃薯 实时荧光定量PCR 拷贝数 农艺性状
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 页码范围: 68-75
• 分类号: Q786|S532
• 语种: 中文
• DOI: 10.11841/j.issn.1007-4333.2015.06.09

摘要

以转基因马铃薯株系为材料,采用Real-time PCR方法,以SYBR Green I为荧光染料,以马铃薯块茎贮藏蛋白基因(Patatin)作为内参基因,以植物表达载体上的潮霉素抗性基因(HPT)为筛选标记基因,建立目的基因CT值与起始模版的相关性标准曲线,通过实时荧光定量PCR分别获得每个样品中内参基因和外源基因的CT值,根据Pfaffl法计算获得了T-DNA在转基因马铃薯中的拷贝数,且与Southern blot方法进行了比较,并结合田间农艺性状,分析了外源基因拷贝数马铃薯株高及薯块产量的影响.结果表明,内参基因和外源基因标准曲线的相关系数分别为R2 =0.996、R2 =0.995和R2 =0.990.在所测的23株转基因株系中,12株为单拷贝插入,6株为双拷贝,5株为多拷贝.Real-time PCR比Southern blot方法结果更准确、操作更简便快捷、成本更低.且插入拷贝数的多少与马铃薯田间农艺性状变化有一定的关系,发现2拷贝以上的T-DNA插入较容易引起部分性状的改变.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石建斌	青海大学农林科学院	8	45	5.0	6.0