不结球白菜响应ABA和低温基因WRKY18的克隆及表达分析

• 作者: 侯喜林 唐君 王枫 马静 黄菲艺
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 不结球白菜 WRKY18 低温 ABA 非生物胁迫 序列分析 实时定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 189-196
• 分类号: S634.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2015.02.003

摘要

[目的] WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应.克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义.[方法]采用电子克隆的方法在NCBI数据库中进行不结球白菜WRKY18基因全长拼接,然后在不结球白菜‘苏州青’中,克隆到1个与低温及ABA响应相关的WRKY基因,通过生物信息学手段和实时定量RT-PCR(qRT-PCR)技术分析了该基因的序列结构特征及其在低温和ABA处理下的表达变化.[结果]该基因全长为1 080 bp,含有978 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸,与油菜及拟南芥的WRKY18直系同源,氨基酸序列相似性分别为87％和73％,命名为Bc WRKY8.序列分析表明,该编码蛋白为核蛋白,不含跨膜区,无信号钛,具有WRKYGQK基序(motif)约60个氨基酸残基的WRKY保守结构域,为WRKY转录因子家族成员.系统聚类分析指出了BcWRKY18蛋白的保守性及其在开花植物中的进化关系;序列结构和同源建模分析指出了BcWRKY18蛋白的保守结构域、蛋白质的二级及三级结构分布模型;qRT-PCR检测了Bc WRKY18基因在ABA和低温胁迫下的表达,表明低温和ABA都能诱导BcWRKY18基因表达,其表达模式都存在相似的过程,且BcWRKY18基因对ABA的响应比对低温的响应更快、更明显.[结论]从不结球白菜中克隆获得1个新的WRKY类转录因子基因BcWRKY18,基因表达分析发现BcWRKY18可能存在对ABA和低温的共响应及自身反馈调控.