柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其在蛋白定位中的应用

• 作者: 朱顺海 李莎 杨斯涵 梁思婷 翟颀 董辉 赵其平 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 乳酸脱氢酶 单克隆抗体 免疫荧光定位
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 47-52
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723
• 字数: 3547字
• 语种: 中文

摘要

为了制备柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella lactate dehydrogenase,EtLDH)单克隆抗体,用大肠杆菌表达的重组EtLDH可溶性蛋白免疫BALB/c小鼠,经5次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,经3次亚克隆后获得2株能稳定分泌tLDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F7和2H4,抗体亚类鉴定均为IgGl,腹水效价分别为1:8000和1:64 000.Western blot结果显示2F7抗体能识别柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中大小约为35 kDa的天然蛋白.利用该单抗对EtLDH在柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的分布进行了定位,结果显示该蛋白主要分布于裂殖子的细胞质,表明成功地制备了EtLDH单克隆抗体,为深入研究tLDH的功能和特性奠定了基础.