日本血吸虫过氧化物氧化还原蛋白SjPrxⅠ的原核表达及其免疫调节功能

• 作者: 刘芳 张奕 徐元宏 沈继龙 王书书 谢园园 陈鹤
• 来源期刊: 中华疾病控制杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血吸虫,日本 过氧化物氧化还原蛋白 Th2型免疫应答
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 835-838
• 分类号: R383.24|R392.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16462/j.cnki.zhjbkz.2015.08.020

摘要

目的 对日本血吸虫氧化还原蛋白(peroxiredoxin of schistosoma japonicum,SjPrx)的表达、纯化,接种小鼠和体外刺激脾细胞,研究SjPrx Ⅰ在体内外诱导免疫应答的作用及可能机制.方法 GenBank获取SjPrx编码序列,设计合成引物进行PCR扩增;构建质粒,通过转化将构建的重组质粒转入感受态细胞,然后小量扩增菌株,电泳检测克隆成功表达.蛋白质印迹法(western blot,WB)验证融合蛋白后大量表达纯化.将重组SjPrx Ⅰ通过腹腔注射BALB/c小鼠,本科联免疫吸附实验和流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测脾细胞分泌细胞因子.结果 成功构建了SjPrx Ⅰ-pET28a质粒,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达后得到可溶性SjPrxⅠ,纯化后的SjPrx Ⅰ免疫小鼠,其淋巴细胞高水平表达Th2细胞分泌的IL-4(t =6.69,P＜0.001)、IL-10(z =3.18,P=0.001)和IL-13(t =4.21,P=0.001).结论 制备了重组SjPrx Ⅰ,初步认为其具有Th2型免疫调节功能,但并不能显著抑制体内业已存在的Th1的偏移.