农杆菌介导的马尔尼菲青霉基因转化技术的建立及优化

• 作者: 曹存巍 李昕 李鑫垒
• 来源期刊: 中国真菌学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 马尔尼菲青霉 农杆菌 转化
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 88-91
• 页数: 4页
• 分类号: R379.9
• 字数: 2868字
• 语种: 中文

摘要

目的：建立农杆菌介导的马尔尼菲青霉（PM）基因转化技术，并对该技术条件进行优化。方法以二元质粒pDHt／ SK 为载体，通过农杆菌介导将 pyrG 基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株 SPM4（pyrG?，niaD?）中，在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子。运用 PCR 验证重组子。进一步对影响转化效率的农杆菌类型、共培养浓度、转化媒介、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮（AS）等六个条件进行优化。结果 PCR 验证 pyrG 基因成功的插入 SPM4中，所得到转化子可稳定传代，通过条件优化，得到转化子约300个／106个细胞。选用 AGL?1，以农杆菌共培养浓度为 OD600＝0．8，AS 浓度为200μmol／ L，无膜 IM 固体共培养基为介质，25℃共培养48 h 为最适转化条件。结论成功建立了农杆菌介导 PM 基因转化技术，简化并优化了转化条件，该方法可用于 PM 基因功能研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹存巍	广西医科大学第一附属医院皮肤性病科	36	131	7.0	8.0
2	李昕	常德市第一人民医院皮肤性病科	3	3	1.0	1.0
3	李鑫垒	广西医科大学第一附属医院皮肤性病科	1	3	1.0	1.0