原生质体介导马尔尼菲青霉基因转化体系的优化

• 作者: 冯姣 史茗岚 席丽艳 肖星 蒋敏敏 蔡文莹 贺莉雅 陈志文 陈春梅
• 来源期刊: 中国真菌学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 马尔尼菲青霉 原生质体 转化
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 140-144
• 页数: 5页
• 分类号: R379.9
• 字数: 4335字
• 语种: 中文

摘要

目的 优化原生质体介导的马尔尼菲青霉转化体系,为其基因功能研究提供良好的平台.方法 通过原生质体介导将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)pyrG基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株ligD(pyrG-,ligD-)中,在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子,运用PCR验证重组子,通过改变影响转化效率的酶解时间、培养基浓度、质粒浓度、不同配方的原生质体洗涤液STC和不同配方的原生质体助融剂PTC 5个条件对体系进行优化.结果 PCR验证A.nidulans pyrG基因成功的插人ligD中,转化子可稳定传代.最适合ligD原生质体转化效率的条件为:酶解时间6h,PTC (60％ PEG-4000,100 mmol/L Tris-HCl pH8.0,100 mmol/L CaCl2),每100 tL原生质体(106～107/mL)加入2.5 μg质粒,0.6 mol/L蔗糖SD/SDU筛选/再生培养基,每1μg质粒转化子可达68个左右.结论 成功优化了原生质体介导马尔尼菲青霉转化体系的条件,优化后该方法转化效率高,为基因功能研究提供良好平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	席丽艳		112	430	10.0	15.0
2	陈志文		5	12	3.0	3.0
3	蒋敏敏		4	0	0.0	0.0
4	蔡文莹		15	40	5.0	5.0
5	肖星		4	8	2.0	2.0
6	贺莉雅		3	3	1.0	1.0
7	陈春梅		1	0	0.0	0.0
8	冯姣		1	0	0.0	0.0
9	史茗岚		1	0	0.0	0.0