一种新型家蝇幼虫抗菌肽基因(MDAP-2)的真核表达及抑菌活性检测

• 作者: 刘树明 唐艳 孔令聪 张丹丹 李文婷 裴志花 贾博岩 闫恕 马红霞
• 来源期刊: 中国兽药杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 家蝇抗菌肽(MDAP-2) 毕赤酵母 分泌表达 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 微生物与免疫
• 页码范围: 11-16
• 页数: 6页
• 分类号: S852.6
• 字数: 3622字
• 语种: 中文

摘要

利用毕赤酵母表达系统表达新型家蝇抗菌肽MDAP-2基因(Musca domestica antimicrobial peptide,MDAP-2),为其作为新型抗菌物质应用于临床提供实验依据.根据已有的MDAP-2的氨基酸序列,采用PCR技术扩增获得MDAP-2基因,构建真核重组表达质粒pPIC9K-MDAP-2,将线性化的重组质粒电击转入毕赤酵母(P.pastoris)感受态GS115细胞内,将PCR鉴定为阳性的重组酵母菌进行甲醇诱导表达,并采用Tricine-SDS-PGAE检测表达产物的大小,经镍柱亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白,采用管碟法检测重组蛋白的生物学活性.结果显示,重组质粒pPIC9K-MDAP-2获得高效表达,蛋白分子量为7.8 kD,管碟法检测重组蛋白对大肠杆菌与沙门氏菌均具有体外抑菌活性.MDAP-2基因的成功表达为进一步研究表达产物的生物学及免疫学活性奠定基础.