甜菜夜蛾拓扑异构酶Ⅰ氨基酸突变对其DNA解旋活性的影响

• 作者: 张佩 张兰 张燕宁 蒋红云 贾伟
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甜菜夜蛾 拓扑异构酶Ⅰ 突变 氨基酸替换 DNA解旋活性 pBR322
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 933-940
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2015.09.001

摘要

[目的]为了探究甜菜夜蛾Spodoptera exigua拓扑异构酶Ⅰ(topoisomerase Ⅰ,Top Ⅰ)氨基酸突变对其DNA解旋活性的影响.[方法]通过克隆甜菜夜蛾TopⅠ基因,构建原核表达载体,采用完全重叠PCR定点突变技术,向甜菜夜蛾Top Ⅰ的V420,L530,A653和S729(根据人Top Ⅰ氨基酸序列编号)4个位点引入突变,将改造成功的重组TopⅠ基因转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,诱导重组蛋白表达、纯化,测定Top Ⅰ突变对其解旋活性的影响.[结果]完全重叠PCR能实现甜菜夜蛾TopⅠ定点突变.重组蛋白在体外得到稳定的表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析在96.0 kDa处出现特异性条带.通过对重组蛋白分离纯化并测定对质粒pBR322解旋酶活性,发现引入V420I,L530P和A653T突变后Top Ⅰ的比活力显著降低,而引入S729T突变后比活力与野生型蛋白无显著差异.[结论]本研究证明在甜菜夜蛾Top Ⅰ中引入V420I,L530P和A653T突变后,其对底物pBR322的解旋活性显著降低,为后期探索甜菜夜蛾Top Ⅰ的定点突变与其对喜树碱及其衍生物敏感性的关系奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张兰	中国农业科学院植物保护研究所农业部作物有害生物综合治理综合性重点实验室	51	179	7.0	11.0
2	贾伟	中国农业科学院植物保护研究所农业部作物有害生物综合治理综合性重点实验室	53	352	13.0	17.0
3	蒋红云		28	174	6.0	13.0
6	张燕宁	中国农业科学院植物保护研究所农业部作物有害生物综合治理综合性重点实验室	30	126	6.0	10.0
13	张佩	中国农业科学院植物保护研究所农业部作物有害生物综合治理综合性重点实验室	2	7	1.0	2.0