突变型低氧诱导因子1α加速骨缺损部位新血管生成的实验观察

• 作者: 李谌 王皓 郜玉忠
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 低氧诱导因子 1α 基因突变 重组腺病毒载体 骨髓间充质干细胞 血管生成 骨缺损
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 455-461
• 页数: 7页
• 分类号: R683.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201504006

摘要

目的：通过突变低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1,HIF1α)基因的3个氨基酸位点研究该基因在常氧条件下骨缺损区域对血管新生效应的影响。方法定点突变 HIF1α编码区(coding sequence,CDS)402、564和803位3个氨基酸后将基因重组入腺病毒 pAdEasy-1系统并测定滴度,同理包装未突变组和空病毒组；以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验(A 组：含突变 HIF1α基因病毒液,B 组：含未突变 HIF1α基因病毒液,C 组：空病毒液, D 组：空白组)；将病毒液转染入兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内,通过示踪因子人源化绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)观察病毒转染效率,检测各组转染细胞中 HIF1α基因 mRNA 和蛋白表达情况；制作兔桡骨缺损动物模型,将含目的基因的病毒液按上述分组转染 MSCs 后作为种子细胞移植到多孔纳米磷灰石-硅灰石生物活性玻璃陶瓷(apatite-wollastonite magnetic bioactive glass-ceramic,A-W MGC)载体中搭建人工组织工程骨架载体并植入体内,于术后8周处死各组动物,取植入区域组织做新血管生成检测。结果CDS 区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸；3种腺病毒重组体构建成功并鉴定完毕；A、B 两组 HIF1αmRNA 表达量明显高于 C、D 两组,差异具有统计学意义(P <0.05),而 A、B 两组之间及 C、D 两组之间比较,差异无统计学意义(P >0.05)；A 组 HIF1α蛋白表达量明显高于其他3组,差异具有统计学意义(P <0.05),而 B、C、D 3组之间比较差异无统计学意义(P >0.05)；A 组转染到动物体内后可见明显成血管效果,其他3组未见缺损区域有血管新生。结论①3点突变后 HIF1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达；②3点突变后 HIF1α基因能够在体内局部形成有效的血管网络。