RNA 干扰抑制大鼠主动脉内皮细胞血管紧张素原表达的实验研究

• 作者: 刘晶 和姬苓 孙洪英 张佳 徐莹 敖媛媛 杨国安
• 来源期刊: 临床神经病学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: RNA干扰 基因沉默 内皮细胞 血管紧张素原 缺血性脑血管疾病
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 362-366
• 页数: 5页
• 分类号: S852
• 字数: 5812字
• 语种: 中文

摘要

目的 研究RNA干扰技术对大鼠主动脉内皮细胞血管紧张素原( AGT )表达的抑制. 方法 构建携带AGT基因特异短发夹RNA( shRNA)编码序列的质粒载体,与脂质体转染剂以最佳配比复合,转染传代3~5代的大鼠主动脉细胞,于转染后24 h、48 h、72 h在倒置荧光显微镜下检测转染效率,采用RT-PCR法检测AGT mRNA的表达水平,应用BCA蛋白定量试剂盒来测定大鼠内皮细胞的蛋白浓度,应用Wwestern blot法检测转染前和转染后的大鼠主动脉内皮细胞 AGT 的蛋白表达. 结果 ( 1 )当质粒与脂质体转染剂TMETAFECTENE EASY+以1:4的最佳配比复合时,转染48 h时细胞转染效率最高为(67.25 ±2.49)%. (2)空白对照组、阴性对照组与干扰组转染后的大鼠主动脉内皮细胞的AGT mRNA相对表达量分别为100%、98.4%和24.3%,且干扰组的AGT mRNA相对表达量明显低于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05). (3)大鼠内皮细胞的蛋白浓度的标准曲线方程为y=0.4563x,所提取的大鼠主动脉内皮细胞AGT的蛋白含量为0.0456~0.9126μg/μl. (4)转染pAGT-shRNA1、pAGT-shRNA2、pAGT-shRNA3、pAGT-shRNA4的AGT蛋白表达量分别为(0.11 ±0.02)、(0.12 ±0.03)、(0.14 ±0.01)、(0.14 ±0.08);与空白对照组(0.58 ±0.07)和阴性对照组(0.52 ±0.04)相比,干扰组的AGT蛋白表达受到了明显的抑制(均P<0.05),抑制率分别为81.1%、79.3%、75.8%和75.9%. 4种不同靶位点的质粒载体所干扰的表达之间无明显差异(均P>0.05). 结论携带AGT基因特异shRNA编码序列的质粒载体pAGT-shRNA可以通过RNA技术特异性抑制大鼠主动脉内皮细胞的AGT基因的表达,为治疗缺血性脑血管疾病提供新的治疗方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张佳	包头医学院第一附属医院神经内科	19	23	3.0	3.0
2	和姬苓	包头医学院第一附属医院神经内科	50	180	8.0	10.0
3	孙洪英	包头医学院第一附属医院神经内科	41	123	7.0	9.0
4	杨国安	包头医学院第一附属医院基因诊断中心	37	107	6.0	8.0
5	徐莹		2	0	0.0	0.0
6	敖媛媛	包头市第四医院神经内科	1	0	0.0	0.0
7	刘晶		4	2	1.0	1.0