Src家族酪氨酸蛋白激酶对高糖环境中人LECs凋亡及EMT的影响

• 作者: 刘蕊 周健 李东旭 李宝海 陈媛媛
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 葡萄糖 人 晶状体上皮细胞 凋亡 Src家族酪氨酸蛋白激酶 上皮-间质转分化 信号通路
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 485-492
• 页数: 8页
• 字数: 8082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2015.06.002

摘要

背景糖尿病性白内障是糖尿病的主要眼部并发症之一,包括皮质性、核性、囊膜下性及混合型白内障,其表型可能与晶状体上皮细胞(LECs)的不同病理改变有关,而糖尿病囊膜下性白内障是常见的表型之一.研究糖尿病囊膜下性白内障LECs的生物学行为对相关药物的研发和相关疾病的治疗有重要临床意义. 目的 探讨Src-家族酪氨酸蛋白激酶(SFKs)在高糖诱导的人LECs凋亡及上皮-间质转分化(EMT)中的作用. 方法 将人LECs系HLE-B3细胞分为正常对照组、高糖组和PP1组,分别在含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM、含35.5 mmol/L葡萄糖的DMEM及含35.5 mmol/L葡萄糖+10 μmol/L SFK特异性抑制剂PP1的DMEM中培养24 h.分别于细胞培养后3、6、12和24 h采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化;采用免疫荧光染色检测细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的相对表达量;并用Western blot法检测p-Src418(活化的c-Src激酶)及凋亡相关蛋白bcl-xl、survivin、caspase-3,EMT相关蛋白E-cadherin、α-SMA的表达变化. 结果 高糖组人LECs中p-Src418的表达增高,并在培养6h时达峰值,正常对照组、高糖组和PP1组人LECs中p-Src418的相对表达量(相对灰度值)分别为0.042±0.011、0.125±0.036和0.035 ±0.018,正常对照组和PP1组人LECs中p-Src418的表达量明显低于高糖组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).细胞培养后6、12和24 h,高糖组人LECs凋亡率稍高于正常对照组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05),PP1组人LECs凋亡率分别为(6.433±2.084)％、(10.333±2.610)％和(8.033±2.967)％,明显高于高糖组的(3.233±1.320)％、(3.533±1.159)％、(5.733±0.230)％及正常对照组的(3.133±1.170)％、(2.833±0.751)％、(3.333±1.201)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而高糖组与正常对照组间比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).细胞培养后6h和12h,PP1组细胞中凋亡抑制蛋白bcl-xl、survivin的相对表达量(相对灰度值)明显低于高糖组和正常对照组,而凋亡促进蛋白caspase-3的相对表达量明显高于高糖组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).高糖组培养后24 h,LECs呈梭形,发生纤维细胞样改变,PP1组纤维样细胞减少.Western blot法检测和免疫荧光染色均显示,培养后6h高糖组细胞中EMT标志物E-cadherin蛋白的相对表达量低于PP1组和正常对照组,而α-SMA的相对表达量高于PP1组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 高糖环境可激活LECs中的c-Src激酶,进而诱导LECs发生EMT,同时LECs的凋亡减少;用PP1抑制c-Src激酶的异常激活有助于维持高糖环境中LECs的上皮特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘蕊	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	37	97	5.0	8.0
2	周健	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	46	207	9.0	12.0
3	李宝海	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	2	3	1.0	1.0
4	陈媛媛	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	3	3	1.0	1.0
5	李东旭	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	4	4	1.0	1.0