重组瑞替普酶包涵体制备及其体外复性

• 作者: 关怡新 姚善泾 王俊雄
• 来源期刊: 化工学报
• 关键词: 生物分离 蛋白质复性 二硫键 正交实验设计 瑞替普酶
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 生物化学工程与技术
• 页码范围: 230-237
• 页数: 8页
• 分类号: TQ028.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.11949/j.issn.0438-1157.20141141

摘要

将携带重组瑞替普酶(reteplase, rt-PA)的质粒成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)后，诱导表达获得包涵体，考察了诱导剂浓度、培养温度和培养时间等条件对目标蛋白表达量的影响。在此基础上，对高效表达的 rt-PA 包涵体体外复性过程进行了详细研究。首先利用单因素实验考察了复性液pH、GSH浓度、GSH/GSSG比例、蛋白浓度等各种复性条件对复性效果的影响；并结合正交实验设计，进一步研究了高蛋白浓度下复性后 rt-PA 酶活变化情况。以0.2 mmol·L?1 IPTG诱导，在33℃下培养6 h，每升发酵液约可获得1.7 g粗制包涵体。适宜的复性条件为蛋白浓度50μg·ml?1，pH 10.0，GSH浓度1 mmol·L?1，GSH/GSSG比例8，复性收率为87.2%。影响高蛋白浓度下rt-PA复性的关键因素为复性液初始pH及GSH浓度，在800μg·ml?1蛋白浓度下复性后rt-PA比活可达7.54×104 IU·mg?1，荧光光谱分析结果表明复性后rt-PA恢复了其天然态结构。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	关怡新	浙江大学化学工程与生物工程学院	67	627	12.0	20.0
2	姚善泾	浙江大学化学工程与生物工程学院	224	2284	23.0	34.0
3	王俊雄	浙江大学化学工程与生物工程学院	1	6	1.0	1.0