金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制

• 作者: 丁宇 余方友 刘云灵 李丹 王良兴 许园园
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 双组份调节系统 saeRS 反应调节蛋白SaeR
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 625-630
• 页数: 6页
• 分类号: R378.1
• 字数: 4585字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2015.09.001

摘要

目的：初步研究金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制。方法：PCR扩增双组份调节系统SaeRS的反应调节蛋白SaeR基因，构建重组表达质粒pET28a-saeR，用限制性酶切、PCR和基因测序方法进行鉴定。用IPTG诱导表达重组蛋白His SaeR，用镍离子螯合亲和层析法纯化，用Western blot法鉴定。用实时荧光定量RT-PCR方法检测金黄色葡萄球菌SA75及SA75ΔsaeRS突变株luk-PV、hla、coa、fnbB、sak、psmβ基因转录水平。凝胶迁移阻滞实验验证纯化蛋白His SaeR对这些毒力基因启动区序列的结合能力。结果：重组表达质粒pET28a-saeR构建成功；在0.4 mmol/L IPTG，25℃培养12 h的条件下，重组蛋白His SaeR在大肠杆菌中以可溶形式高效表达；与SA75野生株相比，?saeRS突变株luk-PV、hla、coa、fnbB基因转录水平均明显下降，分别为野生株的19.7%、0.3%、31.6%、3.5%；psmβ基因和sak基因转录水平无变化。反应调节蛋白SaeR能有效结合luk-PV、hla、coa、fnbB及其自身P1启动区序列。结论：金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对luk-PV、hla、coa、fnbB基因表达具有正调控作用，而这种作用可能是通过反应调节蛋白SaeR与这些基因启动区序列直接结合而实现。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王良兴	温州医科大学附属第一医院呼吸内科	39	195	9.0	11.0
2	李丹	温州医科大学附属第一医院检验科	13	31	3.0	5.0
3	余方友	温州医科大学附属第一医院检验科	37	119	6.0	9.0
4	许园园	宁波市医疗中心李惠利医院呼吸内科	2	2	1.0	1.0
5	丁宇	温州医科大学附属第一医院检验科	4	12	3.0	3.0
6	刘云灵	温州医科大学附属第一医院呼吸内科	1	2	1.0	1.0