不育相关泛素特异性蛋白酶USP26的分子克隆及活性分析

• 作者: 刘殿武 杜霈 田庆宝 秘迎君 赵晶晶 赵静 闫静 韩薇
• 来源期刊: 中华疾病控制杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 泛素化 克隆,分子 不孕,男(雄)性
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 547-550
• 分类号: R271.41|R349.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16462/j.cnki.zhjbkz.2015.06.003

摘要

目的 对克隆泛素特异性蛋白酶26(ubiquitin-specific protease 26,usp26)基因进行表达和活性测定.方法 采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),从小鼠全血中扩增获得usp26基因并测定序列.将基因片段与pGEX-6p-1拼接,应用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)使蛋白表达并利用Ub-Met-β-gal鉴定活性.用多重比对方法分析人类、小鼠及褐家鼠usp26基因编码氨基酸序列的差异.结果 本实验克隆出usp26基因.构建出pGEX-usp26质粒,该质粒表达出GST-USP26结合蛋白并测得其活性.三个种属含有相同的赖氨酸结构域(Cys box)与组氨酸结构域(His box)特征部位氨基酸.结论 usp26基因克隆并表达成功,完成活性测定,为进一步探索usp26在男性不育机制方面的作用提供了一种活性研究方法.