泛素特异性蛋白酶2a的原核表达纯化及酶活性分析

• 作者: 孙寅玮 张万方 徐磊 樊松乐 王孟慧 黄向瑜
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 泛素特异性蛋白酶2 酶活性分析 液相色谱-质谱联用技术
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 352-358
• 页数: 7页
• 分类号: R362
• 字数: 3711字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.03.005

摘要

目的 为了探讨泛素特异性蛋白酶2a(USP2a)在肿瘤发生发展中的催化机制,构建USP2a C末端催化结构域原核表达质粒pET28a-USP2a-C,分析USP2a C末端催化结构域的活性情况.方法 利用荧光检测方法测定USP2a-C的酶促动力常数,并采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/ MS)分析USP2a的肽酶和异肽酶活性.结果 结果表明获得了可溶性表达的USP2a-C融合蛋白,酶促动力学分析 USP2a-C 水解底物 Ub-AMC 的催化效率 Kcat/Km =2. 53 × 105 mol/(L · s);LC-MS/MS分析结果表明USP2a-C能有效分解 Di-Ub和Ub-V77两种不同性质的底物,并且两者之间的催化活性差异无统计学意义.结论 获得了可溶性表达的 USP2a-C蛋白,并且分析证明其具有完整的去泛素化酶的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙寅玮	新乡学院生命科学技术学院	8	15	3.0	3.0
2	张万方	新乡学院生命科学技术学院	3	2	1.0	1.0
3	王孟慧	新乡学院生命科学技术学院	1	0	0.0	0.0
4	黄向瑜	新乡学院生命科学技术学院	1	0	0.0	0.0
5	樊松乐	新乡学院生命科学技术学院	1	0	0.0	0.0
6	徐磊	新乡学院生命科学技术学院	1	0	0.0	0.0