球形红细菌无机焦磷酸酶的原核表达、纯化及初步分析

• 作者: 孙梅好 戴梦瑶 王艳兴 马建辉 黄园波
• 来源期刊: 山西农业科学
• 关键词: 球形红细菌 无机焦磷酸酶 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 427-433
• 页数: 7页
• 分类号: Q556+.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2481.2013.05.06

摘要

无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,PPase)水解在许多生物大分子的生物合成过程中产生焦磷酸并释放能量,形成的热力学拉力可促进合成反应的进行.球形红细菌(Rhodobacter sphaeroides 2.4.1)无机焦磷酸酶(RsPPase)属于Ⅱ型可溶性焦磷酸酶,钴离子对于其活性的维持具有重要的功能,而其活性调控及其表达对细菌生长的影响尚未报道.研究克隆、原核表达纯化RsPPase.结果发现,钴离子会导致谷胱甘肽S-转移酶(glutathione sulfotransferase,GST)标签不能进行蛋白酶切,且融合蛋白GST-PPase水解焦磷酸的催化效率较低(Km/kcat=2.0×104 mol/(L·s));在球形红细菌胞内表达大肠杆菌焦磷酸酶(Km/kcat=5.5×107 mol/(L·s))没有影响细菌的生长,暗示球形红细菌胞内PPase活性足够高.通过对其结构的模拟推测,在钴离子存在的情况下为闭合构象,GST标签的存在可能影响PPase羧基端结构域的运动,而影响其结合底物和释放产物的能力；在钴离子不存在的情况下为开放构象,GST标签具有较大的自由度,可暴露蛋白酶识别位点酶切产生无标签RsPPase.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙梅好	浙江师范大学化学与生命科学学院	29	45	4.0	5.0
2	马建辉	浙江师范大学化学与生命科学学院	6	17	3.0	3.0
3	王艳兴	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所	2	9	2.0	2.0
4	黄园波	浙江师范大学化学与生命科学学院	2	5	2.0	2.0
5	戴梦瑶	浙江师范大学化学与生命科学学院	1	3	1.0	1.0