过氧化氢酶过表达对α粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响

• 作者: 佟鹏 张伟 王春燕 苟巧 邵帅 魏志权 齐雪松
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 过氧化氢酶 过表达 α粒子 肺癌 DNA氧化损伤
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1011-1017
• 分类号: R734.2|R73-36
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨过氧化氢酶(catalase,CAT)过表达对α粒子辐射致肺癌细胞模型BERP35T1内DNA氧化损伤水平和恶性表型的影响.方法 构建pEGFP-CAT真核表达质粒,经PCR、双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组表达质粒及空载体转染至BERP35T1细胞中,经G418筛选出具有抗性的细胞株.Real-time PCR和Western blot法检测BERP35T1细胞中CAT基因mRNA转录和CAT蛋白表达水平;免疫细胞化学法、MTT法、细胞划痕愈合试验和锚着独立生长试验分别检测CAT过表达对BERP35T1细胞DNA氧化损伤水平(8-OHdG水平)、增殖(细胞存活率)、迁移能力(细胞迁移距离)和锚着独立性(软琼脂克隆形成率)的影响.结果 重组表达质粒pEGFP-CA T经PCR、酶切鉴定和DNA测序证实构建正确,获得了CAT稳定表达的BERP35T1细胞株BERP35T1-CA T-7.空白对照BERP35T1、BERP35T1-pEGFP和BERP35T1-CA T-7细胞中CAT基因mRNA转录水平分别为0.90±0.23、1.00±0.12和2.91±0.41,CAT蛋白相对表达水平分别为0.97±0.11、1.00±0.00和5.72±1.28,8-OHdG表达水平分别为1.65×10-2、1.60×10-2和8.95×10-3,细胞存活率分别为(95.33±4.26)％、(100.00±8.29)％和(61.63±3.08)％,细胞迁移距离分别为(150.68±9.98) μm、(115.02±30.73) μm和(44.25±10.53) μm,细胞软琼脂克隆形成率分别为(2.50±0.02)‰、(2.10±0.02)‰和(0.70±0.02)‰.结论 CAT过表达可能通过降低DNA氧化损伤水平,抑制BERP35T1细胞的增殖、转移和锚着独立生长能力等恶性表型.