重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子生物学活性测定TF-1细胞/MTT比色法的优化及其验证

• 作者: 严永男 于丽娟 刘英华 周丽红 李丹 李利 田云蕾 许国杰
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: TF-1细胞/MTT比色法 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 生物学活性 优化 验证
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1311-1315
• 分类号: R733.7|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 对检测重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor,rhGM-CSF)生物学活性的TF-1细胞/MTT比色法进行优化及验证.方法 以rhGM-CSF依赖细胞株TF-1为靶细胞,采用MTT比色法测定rhGM-CSF生物学活性,对比色法中裂解液种类、裂解时间、细胞浓度、MTT作用时间等进行优化,并对优化后的方法进行准确度和精密度验证.结果 优化后的TF-1细胞/MTT比色法:将供试品及标准品稀释至18 IU/ml,做2倍系列稀释,共8个稀释度,50μl/孔;加入6×105个/ml TF-1细胞悬液,50μl/孔,37℃培养48 ～ 52 h;加入MTT溶液,20μl/孔,37℃培养5h;加入15％ SDS裂解液,150μl/孔,裂解过夜,检测A570值.3种不同浓度的rhGM-CSF标准品活性测定结果回收率为104％;rhGM-CSF标准品6次检测活性平均值为18.6 IU/ml,变异系数为5.37％;rhGM-CSF标准品3d活性检测结果的平均变异系数为5.18％.结论 采用优化后MTT比色法检测rhGM-CSF生物学活性,准确度和精密度均较高,可应用于rhGM-CSF活性的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许国杰		5	23	3.0	4.0
2	周丽红		5	15	3.0	3.0
3	李丹		1	1	1.0	1.0
4	田云蕾		1	1	1.0	1.0
5	于丽娟		1	1	1.0	1.0
6	刘英华		1	1	1.0	1.0
7	严永男		1	1	1.0	1.0