绵羊CYP19基因卵巢启动子的克隆及其表达活性研究

• 作者: 刘月琴 孙洪新 张英杰 敦伟涛 陈晓勇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 CYP19 卵巢启动子 表达
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1540-1548
• 页数: 9页
• 分类号: S826.2
• 字数: 6497字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.09.008

摘要

本研究旨在克隆绵羊CYP19基因卵巢启动子序列片段,构建真核表达载体,并在细胞水平检测其组织特异性表达情况.参考已知序列设计特异性引物,PCR扩增绵羊CYP19基因卵巢启动子1.1和0.5 kb两个片段,并与已公布的序列进行同源性比较;将测序正确的两个片段分别定向克隆到去除CMV的pEGFP-N2载体骨架中,构建真核表达载体pCYP19-1.1-EGFP-N2和pCYP19-0.5-EGFP-N2,重组质粒在脂质体LipofectamineTM LTX+PLUS介导下,分别转染绵羊的颗粒细胞和胎儿成纤维细胞,并于转染后24、48和72 h观察EGFP表达情况.结果表明,扩增获得片段与已公布序列高度同源;应用转录因子结合位点预测软件对所得序列分析表明,该扩增片段含有类似于TATA-box核心启动顺式元件,并含有多个潜在转录因子的结合位点.转染24 h后,发现pCYP19-1.1-EGFP-N2在颗粒细胞可观测到绿色荧光表达,48 h荧光细胞数量有所增加;转染72 h时荧光细胞数最多;在胎儿成纤维细胞也有少量EGFP基因表达.pCYP19-0.5 EGFP-N2在颗粒细胞和成纤维细胞中均未检测到荧光.结果表明,扩增所得的绵羊CYP19基因卵巢启动子1.1kb片段可引导外源基因在颗粒细胞中的表达,可用于与繁殖相关的基因功能及转基因动物研究,但并非卵巢特异性启动子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张英杰	河北农业大学动物科技学院	212	788	13.0	19.0
2	孙洪新	河北农业大学动物科技学院	74	411	10.0	17.0
4	刘月琴	河北农业大学动物科技学院	171	654	12.0	18.0
5	陈晓勇		59	214	8.0	10.0
6	敦伟涛		58	206	8.0	10.0