FUT8基因RNAi慢病毒载体的构建及对MCF-7细胞增殖的影响

• 作者: 于海涛 岳丽玲 李成冲 温宪春 赵月生 韩翠翠
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: FUT8基因 慢病毒载体 RNA干扰 MCF-7细胞
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 231-236
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.035

摘要

旨在构建FUT8基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响.针对FUT8基因设计3组短发夹RNA序列,退火合成双链DNA,通过连接线性化的pGC-LV-GFP载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并将其转化至感受态细胞DH5α;测序验证正确后进行FUT8基因慢病毒载体的包装及病毒滴度测定,将获得的重组慢病毒pGC-shFUT8转染MCF-7细胞,利用Real time-PCR、Western blot分别验证转染后MCF-7细胞中FUT8 mRNA及蛋白的表达,MTT法及克隆形成实验检测shFUT8对MCF-7细胞增殖能力的影响.测序证实成功构建针对FUT8基因的RNAi慢病毒载体;慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒悬液滴度＞5×108 TU/mL;荧光显微镜下观察各转染组细胞GFP的表达,转染效率达90%以上;Real-time PCR、Western blot结果显示干扰组FUT8的mRNA及蛋白表达水平较对照组显著降低,其中pGC-shFUT8-2序列对FUT8基因的干扰效率可达80%,干扰效果最佳,FUT8沉默后MCF-7细胞增殖能力下降.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳丽玲	齐齐哈尔医学院医药科学研究中心	53	261	10.0	14.0
2	于海涛	齐齐哈尔医学院医药科学研究中心	59	306	10.0	15.0
3	温宪春	齐齐哈尔医学院医药科学研究中心	16	80	6.0	8.0
4	李成冲	齐齐哈尔医学院医药科学研究中心	22	84	6.0	8.0
5	韩翠翠	齐齐哈尔医学院医药科学研究中心	13	13	2.0	3.0
6	赵月生	齐齐哈尔医学院附属第三医院乳腺外科	2	3	1.0	1.0