Vero细胞无血清培养基的优化

• 作者: 廖国阳 李卫东 杨帆 段盼盼 王明清 耿兴良 郭琦 龙云凤 龙艺
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Vero细胞 无血清培养基 优化 试验设计
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 518-522
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 通过试验设计(design of experiments,DOE)方法和统计学分析快速优化Vero细胞无血清培养基.方法 以DMEM/F12为基础培养基,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验考察7种添加物胰岛素、人转铁蛋白、透明质酸、牛血清白蛋白、亚硒酸钠、表皮生长因子和高密度脂蛋白对Vero细胞生长的影响,以CCK-8测定的吸光度值(A490)为响应值,优化Vero细胞无血清培养基.用最优化的因子浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞,对优化结果进行验证.结果 通过Plackett-Burman试验筛选出胰岛素、牛血清白蛋白和人转铁蛋白对Vero细胞生长影响较大;采用最陡爬坡试验和Box-Behnken试验进一步优化,Design-Expert 8.06软件进行回归分析,得到胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白的最佳浓度分别为5.625 μg/ml、14.034 μg/ml和3.92 mg/ml,在此优化条件下的A490值为2.3,较基础培养基提高了3.41倍.用最优的胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞的A490值为2.148,为预测值的93.4％,符合度较高.结论 应用DOE方法快速高效地优化了Vero细胞无血清培养基,为无血清培养基的研制奠定了基础.