不可逆性电穿孔介导 HPV16 E6 shRNA 干扰质粒对宫颈癌 SiHa 细胞增殖的影响

• 作者: 余腾骅 华媛媛 吴雨桐 周玮 张文倩 熊正爱 王智亮 秦琴
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 电穿孔 干扰质粒 宫颈肿瘤 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1107-1112
• 页数: 6页
• 分类号: R737.33
• 字数: 4358字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20150602

摘要

目的：探讨利用治疗剂量脉冲电场产生不可逆电穿孔（IRE）介导 HPV16 E6 shRNA 干扰质粒进入细胞的可行性，阐明二者共同作用对宫颈癌 SiHa 细胞增殖的影响及其作用机制。方法：将 HPV16 E6基因特异性干扰序列插入 pGenesil-1质粒，构建 HPV16 E6 shRNA 真核表达载体，将10个电压为800 V、脉宽100μs、频率1 Hz 的 IRE 作用于 SiHa 细胞与 HPV 16 E6 shRNA 干扰质粒的混悬液，根据处理因素组合，分为空白对照组、IRE 处理组、pGenesil-N 组、pGenesil-N＋IRE 组、pGenesil-E6组和 pGenesil-E6＋IRE 组。在荧光显微镜下观察 SiHa 细胞绿色荧光蛋白（GFP）的表达，计算 GFP 表达效率；RT-PCR 法检测 HPV 16 E6 mRNA 表达水平，Western blotting 法检测 HPV16 E6蛋白、P53及 PCNA 蛋白表达水平，CCK-8法检测各组 SiHa 细胞增殖能力的变化。结果：成功构建 HPV16 E6 shRNA 真核表达载体，IRE 处理后24 h 细胞即可见到绿色荧光；与IRE 组比较，pGenesil-E6＋IRE 组 E6 mRNA 表达水平下降（P ＜0.05），E6蛋白表达水平降低（P ＜0.05）， P53蛋白表达水平增高（P ＜0.05），PCNA 表达水平下降（P ＜0.05）；CCK-8法检测，与 pGenesil-E6组比较， pGenesil-E6＋IRE 组细胞增殖活性下降更明显（P ＜0.05）。结论：治疗剂量的 IRE 可介导外源基因进入细胞，二者联合作用能明显抑制宫颈癌 SiHa 细胞增殖。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊正爱	重庆医科大学附属第二医院妇产科	122	948	16.0	24.0
2	华媛媛	重庆医科大学附属第二医院妇产科	19	136	6.0	11.0
3	王智亮	重庆医科大学附属第二医院妇产科	8	104	5.0	8.0
4	周玮	重庆市妇幼保健院产科	17	97	6.0	9.0
5	张文倩	重庆医科大学附属第二医院妇产科	4	11	2.0	3.0
6	吴雨桐	重庆医科大学附属第二医院妇产科	2	1	1.0	1.0
7	秦琴	重庆医科大学附属第二医院妇产科	6	13	2.0	3.0
8	余腾骅	重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科	6	20	2.0	4.0