雷帕霉素对ARPE19细胞分化的调控作用

• 作者: 丁思加 石厚霞 蒋超 赵晨
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: ARPE19细胞 雷帕霉素 哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白信号通路 分化
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1064-1068
• 页数: 5页
• 字数: 4013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2015.12.003

摘要

背景 视网膜色素上皮(RPE)细胞移植是多种遗传性视网膜变性疾病治疗的研究方向,但体外培养的RPE细胞系都存在细胞的去分化问题,而研究表明哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的异常激活会导致RPE细胞的去分化状态.因此抑制mTOR信号通路应有助于抑制RPE细胞的去分化状态. 目的 观察雷帕霉素是否能够抑制mTOR信号通路,调控人RPE细胞系ARPE19细胞的分化. 方法 将ARPE19细胞接种于12孔板进行培养并分为对照组和雷帕霉素组,分别在培养基中添加DMSO和终浓度400nmol/L的雷帕霉素,分别于细胞培养后24 h和48 h收集各组细胞,通过免疫荧光法检测各组细胞中闭锁小带1(ZO-1)蛋白的表达,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中RPE特异性基因和蛋白的相对表达量. 结果 免疫荧光检测结果显示,雷帕霉素组细胞培养后24 h和48 h,细胞中ZO-1表达的荧光强度均明显增强.实时荧光定量PCR结果显示,雷帕霉素组ARPE19细胞处理后24 h,RPE细胞特异性基因RPE65、MERKT和LRAT mRNA相对表达量较对照组分别提高了25.97％、29.71％和13.00％,差异均有统计学意义(P=0.04、0.04、0.04);雷帕霉素组细胞处理后48 h,RPE65、LRAT、rLBP1、BEST1、keratin18和MERKT mRNA的相对表达量较对照组分别提高了174.00％、88.00％、56.18％、193.81％、10.83％和35.02％,差异均有统计学意义(P=0.00、0.04、0.01、0.04、0.04、0.03).Western blot检测结果显示,雷帕霉素组细胞处理后24 h和48h,细胞中Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-mTOR、p-P70S6和p-S6表达条带均较对照组均明显减弱;雷帕霉素处理细胞后24 h,细胞中RPE特异性蛋白ZO-1蛋白的相对表达量提高40％,差异有统计学意义(P=0.01);雷帕霉素处理细胞后48 h,ZO-1、MERKT、Catenin和LRAT蛋白的相对表达量较对照组分别提高36.00％、57.37％、13.68％和41.07％,差异均有统计学意义(P=0.01、0.00、0.04、0.04). 结论 雷帕霉素可以抑制mTOR信号转导通路的激活,上调ARPE19细胞中RPE特异性基因的表达;抑制mTOR信号转导通路后体外培养的RPE细胞系更接近于活体RPE细胞.