猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆与表达及间接ELISA方法的建立

• 作者: 余正强 周军 尹杰 文心田 曹三杰 李洁萍 杨恒 黄小波
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 克隆与表达 ELISA 诊断
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文

摘要

针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点编码基因片段(SBC,下同)设计合成1对引物,用PCR方法扩增SBC基因,将该基因片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a-SBC.阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达大小约38 kD的蛋白,重组蛋白以包涵体的形式存在.Western blot分析表明,表达产物具有良好的免疫学活性.以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测TGEV抗体的间接ELISA (TGEV SBC-ELISA)方法.表明建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比血清中和试验高,可用于TGEV的检疫和流行病学调查.