检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法的建立及其应用

• 作者: 宫鹏涛 张桐嘉 李建华 李智鹏 李赫 杨举 杨滨僮 王全楷 田来明
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 新孢子虫 鹿 双抗夹心Dot-ELISA方法 MIC6
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 422-425
• 分类号: S855.4|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法,并进行初步应用.方法 以双抗夹心ELISA方法的A490值对应Dot-ELISA方法显色结果的方式,建立双抗夹心Dot-ELISA方法检测结果判定标准,确定HRP标记的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1H11、包被抗体(抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1A1)、待测血清的最佳工作浓度,并对该方法的特异性、重复性及灵敏度进行验证.用建立的方法检测79份鹿血清,并与双抗夹心ELISA方法进行比较.结果 确定该方法HRP-H11抗体的最佳稀释度为1∶100,包被抗体最适工作浓度为0.3 μg/片,待测血清稀释度为1∶8.自然感染犬新孢子虫的鹿阳性血清的敏感性稀释度为1∶64,与弓形虫阳性血清无交叉反应,敏感性、特异性较强;自然感染新孢子虫的鹿阳性血清3次检测结果重复性较好.该方法检测的76份鹿血清中,阳性12份,阳性率为15.2％,与双抗夹心ELISA方法检测结果一致.结论建立的双抗夹心Dot-ELISA方法可用于检测鹿群感染新孢子虫循环抗原,为新孢子虫病的诊断提供了新的方法.