hBMP2与hVEGF165双基因腺病毒载体转染BMSCs复合n-HA/PA66组织工程骨构建及检测

• 作者: 刘洪美 孟纯阳 张聪 李庆伟 梁啸 陈国武
• 来源期刊: 中国矫形外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白2 血管内皮生长因子165 骨髓间充质干细胞 生物支架 组织工程骨
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 270-275
• 分类号: R687
• 语种: 中文
• DOI: 10.3977/j.issn.1005-8478.2015.03.17

摘要

[目的]探讨腺病毒介导共表达人骨形态发生蛋白2 (bone morphogenetic protein 2,BMP2)和血管内皮生长因子165 (vascular endothelia growth factor 165,VEGF 165)载体转染兔骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(nano-hydroxyapatite/polyamide66,n-HA/PA66)体外构建组织工程骨的可行性.[方法]采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),取第3代BMSCs进行细胞表型鉴定;第3代BMSCs作为细胞实验对象,实验共分2组:Ad-BMP2-VEGF165为实验组和Ad-GFP为对照组;首先用不同感染复数感染BMSCs,并进行ELISA和Westem blot检测细胞hBMP2和hVEGF165的表达;其次将感染后的细胞接种到n-HA/PA66生物材料上,7d后扫描电镜观察细胞贴附、生长状况;同时,7d后消化收集贴附n-HA/PA66上的细胞,Western blot检测贴附生物材料细胞中骨钙素(osteocalcin,OC)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达,以及3d和7d后的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定.[结果]第3代细胞表面高表达CD29 (99.82％)和CD44 (94.14％),低表达CD14 (3.11％)和CD34 (0.34％);腺病毒感染后hBMP2和hVEGF165蛋白水平高表达;扫描电镜见感染细胞分布均匀,生长状态良好.实验组与对照组相比,复合n-HA/PA66后Western Blot检测显示OC和OPN表达和ALP活性均较高,两组差异均有统计学意义(P＜0.05).[结论]Ad-BMP2-VEGF165双基因腺病毒感染BMSCs后目的蛋白较高量表达,同时感染后BMSCs可以在n-HA/PA66进行良好的黏附、生长、增殖、矿化,Ad-BMP2-VEGF165双基因表达组织工程骨构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟纯阳	济宁医学院附属医院脊柱外科	88	366	10.0	15.0
2	李庆伟	济宁医学院附属医院脊柱外科	19	75	4.0	7.0
3	梁啸	济宁医学院附属医院脊柱外科	10	19	3.0	3.0
4	刘洪美	济宁医学院病理学教研室	19	85	4.0	8.0
5	张聪	济宁医学院附属医院脊柱外科	9	17	3.0	3.0
6	陈国武	济宁医学院附属医院脊柱外科	13	59	4.0	7.0