光谱及分子探针方法研究番茄 Metacaspase蛋白与Ca2＋的相互作用

• 作者: 吴坤胜 崔金田 曲桂芹 温帅 罗云波 马营轩
• 来源期刊: 光谱学与光谱分析
• 学科: 化学
• 关键词: 番茄M etacaspase Ca2+ 圆二色谱 荧光光谱 Ca2+探针
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 页码范围: 1643-1648
• 页数: 6页
• 分类号: O657.3
• 字数: 3727字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3964/j.issn.1000-0593(2015)06-1643-06

摘要

Metacaspases（MCPs）是发现于植物、真菌、原生动物体内的一种结构上类似多细胞动物Caspase的半胱氨酸蛋白酶家族，其大多数成员的激活依赖于钙离子，但钙离子如何影响MCPs的激活机制有待深入研究。借助圆二色谱技术、Terbium／Stains‐all探针技术以及荧光光谱技术，以番茄Ⅱ型 Metacaspase （LeMCA1）重要位点突变的三种体外原核表达重组蛋白，包括LeMCA1C139A （活性催化位点突变体）、LeM‐CA1K223G （自降解位点突变体）以及预测的Ca2＋结合位点突变体LeMCA1D116A／D117A为研究材料，探究了MCPs与Ca2＋相互作用机制。实验结果表明，Ca2＋与LeMCA1之间既不存在强烈的结合作用，也不影响蛋白的二级结构，但Ca2＋通过相互作用改变LeMCA1的三级结构来实现对LeMCA1的酶原激活过程。其中，LeM‐CA1蛋白的Asp‐116，Asp‐117氨基酸残基作为预测的与Ca2＋作用的重要位点，其缺失将导致蛋白与Ca2＋相互作用能力下降。利用圆二色谱、荧光光谱结合离子探针技术研究了典型茄科植物番茄中Ca2＋与LeM‐CA1的相互作用特性，结合之前同源序列比对、位点突变结果确定了LeMCA1中的Asp‐116，Asp‐117氨基酸残基影响着Ca2＋与蛋白质的相互作用。该结果对后续LeMCA1的生化特性及晶体结构的解析研究有着重要的参考价值。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗云波	中国农业大学食品科学与营养工程学院	257	3241	29.0	44.0
2	曲桂芹	中国农业大学食品科学与营养工程学院	21	116	7.0	10.0
3	温帅	中国农业大学食品科学与营养工程学院	2	2	1.0	1.0
4	马营轩	中国农业大学食品科学与营养工程学院	1	1	1.0	1.0
5	吴坤胜	中国农业大学食品科学与营养工程学院	2	5	1.0	2.0
6	崔金田	中国农业大学食品科学与营养工程学院	1	1	1.0	1.0