云南省边境地区疟原虫18S rRNA基因种类鉴定与序列分析

• 作者: 刘慧 周红宁 张苍林 李春富 杨亚明 王剑 聂仁华
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫 间日疟原虫 18S rRNA基因 巢式PCR 聚类分析
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 220-226
• 分类号: R382.312
• 语种: 中文

摘要

目的 使用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法对云南省边境地区镜检为恶性疟和间日疟的患者血样进行鉴定,分析该地区疟原虫18S rRNA基因序列之间的差异. 方法 2004-2011年在云南省边境地区西双版纳勐腊、保山腾冲和德宏盈江,及缅甸那威、南卡江、芒东和拉咱等7个县(市)收集镜检为单一感染恶性疟原虫或间日疟原虫的全血或滤纸血样品.采用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法对所有血样进行鉴定,阳性PCR产物进行测序.所获序列进行Blastn比对.应用MEGA 6.06软件采用邻接法构建系统进化树. 结果 475份镜检为恶性疟原虫(256份)和间日疟原虫(219份)感染的血样中,经18S rRNA基因检测为恶性疟原虫感染的有242例,间日疟原虫感染176例和混合感染57例.镜检法和巢式PCR法检测结果一致的血样占81.7％(388/475).两法检测不一致的血样发生频率与其原虫密度显著相关(Spearman's r=-0.408,P＜0.05).多序列比对分析结果显示,共计得到11条、10条恶性疟原虫、间日疟原虫18S rRNA基因同源序列,变异位点分别占2.9％ (6/205)和22.5％ (27/120).所获恶性疟原虫18S rRNA基因序列与来自喀麦隆(GenBank登录号KC428742)等基因序列聚在一个大的分支,与来自荷兰和巴西的3个恶性疟原虫S型18S rRNA基因序列(GenBank登录号U36465、U36466和U36467)的亲缘关系较远.所获间日疟原虫序列与来自泰国的间日疟原虫A型小亚单位核糖体核糖核酸(SSU rRNA)基因序列(GenBank登录号U07367)等聚在一支,与来自泰国的间日疟原虫C型基因序列(GenBank登录号U07368)等参考序列亲缘关系较远. 结论 镜检为单一感染的血样中,巢式PCR检出 57例混合感染.云南省边境地区7个县(市)疟原虫18S rRNA基因序列之间无明显差异.