单增李斯特菌三重实时荧光PCR检测的建立及其毒力基因在分离菌株中分布

• 作者: 刘二龙 吕英姿 李嘉琪 杜雅萍 王娉 袁慕云 许龙岩 郑高彬 陈颖
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 单增李斯特菌 TaqMan-MGB三重实时荧光PCR 毒力基因分布 多位点序列分型
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 451-456
• 页数: 6页
• 分类号: R378
• 字数: 4050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.05.007

摘要

目的 建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monoc ytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重实时荧光PCR检测方法,并对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB基因进行了检测,分析3个毒力基因在多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)聚类群组中的分布情况.方法 根据单增李斯特菌毒力基因hlyA、inlA和plcB的保守序列设计引物和小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针建立三重荧光PCR方法,对其特异性、灵敏度和可重复性进行了测试,并对分离的101株单增李斯特菌进行三重PCR检测.结果 建立的三重实时荧光PCR方法特异于单增李斯特菌的检测,重复性良好,组内Ct值变异系数均小于1.5％,灵敏度可达100 CFU/mL.对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB的检出率分别为98％、75％和98％.在可被MLST分型的89株菌株中,groupⅠ的30株菌株有20株均缺失inlA基因;groupⅡ的57株菌株中有56株三个基因均检出;groupⅢ的菌株hlyA、inlA和plcB三个基因均未检出.结论 本文建立的三重实时荧光PCR方法能准确、快速、稳定的检测单增李斯特菌,101株单增李斯特菌的hlyA、inlA、plcB三个毒力基因的检出情况与单增李斯特菌的MLST分型聚类有较一致的关系,对分析单增李斯特菌毒力的强弱有重要参考意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈颖		152	1036	16.0	21.0
2	王娉		24	85	5.0	7.0
3	刘二龙		9	44	4.0	6.0
4	袁慕云		21	69	6.0	7.0
5	吕英姿		5	12	2.0	3.0
6	许龙岩		22	79	6.0	8.0
7	李嘉琪		3	4	1.0	2.0
8	郑高彬		4	10	2.0	3.0
9	杜雅萍		3	4	1.0	2.0