肝细胞核因子4α增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型建立及初步应用

• 作者: 丁宁 张明香
• 来源期刊: 肝脏
• 关键词: HNF4α 乙型肝炎 体外复制 抗乙肝药物
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 28-33
• 页数: 6页
• 字数: 5137字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种肝细胞核因子4α(HNF4α)增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型.方法 从临床获得的急性乙型肝炎患者血清中扩增并克隆HBV全长DNA;手术获得肝组织中提取总RNA,扩增并克隆HNF4α基因cDNA.BspQI/ScaI双酶切回收HBV全长DNA,HNF4α基因cDNA定向连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA3.1-4α表达载体.将HBV全长DNA 1 μg/孔,按比例共转染pcDNA3.1-4α(0,0.5 μg,1μg)于HepG2细胞,96 h后检测细胞上清中的HBsAg、HBeAg和HBV DNA;以0.5 μg/1 μg pcDNA3.1-4α与HBV全长DNA共转染HepG2细胞,加入不同浓度LAM(0,100 μmol/L)和ETV(0,10 μmol/L),评价建立的体外复制模型.结果 1％ TAE琼脂糖凝胶电泳鉴定HBV全长DNA和HNF4α cDNA PCR产物,条带长度为3.2 kb和1.5 kb;目的片段克隆后测序鉴定正确.胶回收HBV全长DNA克隆质粒酶切目的片段,构建的pcDNA3.1-4a表达载体酶切鉴定正确后,测序鉴定.不同浓度比例的pcDNA3.1-4α与HBV全长DNA转染HepG2细胞后,0 μg/1 μg组合:HBeAg阴性,HBsAg阴性,上清HBV DNA载量为103;0.5 μg/1μg组合:HBeAg阴性,HBsAg A值从0.1升高到1.99,上清HBV DNA载量从1×103 IU/mL升高到4×104 IU/mL;1 μg/1 μg组合:HBeAg阴性,HBsAg A值从0.1升高到2.4,上清HBV DNA载量从1×103 IU/mL升高到1×105 IU/mL;LAM从0～100 μmol/L,细胞上清HBV DNA降低了97.6％;ETV从0～10 μmol/L,上清HBV DNA降低了99.0％.结论 HNF4α增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型,可以体外评价临床常用抗病毒药物,为后续HBV研究提供新思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张明香	沈阳市第六人民医院肝病科	38	125	6.0	9.0
2	丁宁	沈阳市第六人民医院肝病科	5	5	1.0	2.0