杨树SAMT基因超表达载体的构建及遗传转化

• 作者: 吕全 张星耀 理永霞 董慧霞 贾秀贞
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 84K杨 水杨酸甲基转移酶基因(SAMT) 超表达 载体构建 遗传转化
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1709-1717
• 分类号: S763.11|Q319+.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.11.008

摘要

一年生草本植物受到病原菌侵染时,体内的水杨酸甲基转移酶基因(salicylic acid methyltransferase,SAMT)能将植物侵染部位产生的水杨酸(salicylic acid,SA)转化为水杨酸甲酯(methyl salicylate,MeSA),在SA信号转导和植物系统获得抗性(systemic acquired resistance,SAR)中起着重要作用.而多年生木本植物中SAMT基因的功能还有待进一步验证.本研究根据毛果杨(Populus trichocarpa)SAMT基因序列,设计了84K杨SAMT引物,利用Gateway克隆技术,在BP反应酶作用下,使带attB接头的SAMT基因全长开放阅读框与入门载体pDONRTM222进行BP重组反应,将目的基因转入入门载体;转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞DH5α后提取的质粒用MLUI进行酶切,然后在LR酶作用下与超表达载体pMDC32进行LR重组反应,将SAMT转入表达载体,成功构建了SAMT的超表达载体.通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化,获得了SAMT超表达的84K杨转基因植株.为今后研究该基因在杨树抗溃疡病中的功能以及杨树在获得SAR和其他方面的作用提供了基础资料,同时也为研究该基因在其他多年生木本植物中的功能提供参考.