沉默信息调节因子1慢病毒表达载体的构建及其在视网膜神经节细胞中的表达

• 作者: 姚青 孙玉宁 张继荣 张茜 李建宁 杨怡
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 沉默信息调节蛋白质类,酿酒酵母 视网膜神经节细胞 慢病毒感染 细胞,培养的
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 66-69
• 页数: 4页
• 分类号: R774.1
• 字数: 3424字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2016.01.016

摘要

目的 构建沉默信息调节因子1(sirt1)过表达慢病毒载体,观察其在体外培养的视网膜神经节细胞(RGC)中的表达.方法 构建大鼠sirt1 cDNA的过表达慢病毒载体,采用PCR鉴定其是否构建成功.同时将其与GenBank上sirt1 cDNA标准序列进行对比分析.将鉴定后的慢病毒重组表达质粒pLV5-sirt1与包装质粒共转染293T细胞,制备携带sirt1的慢病毒pLV5-sirt1.体外培养Sprague-Dawley大鼠的RGC,应用pLV5-sirt1感染细胞设为sirt1过表达慢病毒组,同时设未感染组和空载体感染组.采用荧光显微镜观察细胞感染效率,实时PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测sirt1 mRNA和蛋白表达水平.结果 PCR鉴定结果显示,在1680碱基对处有扩增条带,表达的DNA条带与sirt1目的片段大小一致.与GenBank上sirt1cDNA标准序列进行对比分析,测序结果显示其含有与设计相同的靶序列.荧光显微镜观察发现,空载体感染组和sirt1过表达慢病毒组均可看到绿色荧光,感染效率在90％以上.实时PCR检测结果显示,sirt1过表达慢病毒组sirt1 mRNA表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,sirt1过表达慢病毒组sirt1蛋白表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建的大鼠sirt1过表达慢病毒载体能够在体外有效感染大鼠RGC,提高sirt1在RGC中的表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李建宁	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	24	51	4.0	6.0
2	杨怡	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	18	27	3.0	3.0
3	张继荣	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	25	71	5.0	7.0
4	姚青	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	32	101	6.0	9.0
5	孙玉宁	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	18	58	3.0	7.0
6	张茜	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	17	29	3.0	4.0