成骨不全病人原代成骨细胞中胶原蛋白提取方法改良

• 作者: 任秀智 刘军龙 张宇昂 滕元伟 韩金祥 鲁艳芹
• 来源期刊: 医学检验与临床
• 关键词: 胶原蛋白提取 原代成骨细胞 盐析 成骨不全
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 字数: 2667字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5013.2016.01.001

摘要

目的：本文对成骨不全患者骨骼中胶原蛋白的提取方法进行探讨，拟建立较为稳定的和可控的提取技术，为该病的治疗寻找新思路。方法：选取成骨不全患者在接受外科矫形手术中废弃的骨骼组织，经原代细胞培养后，采用盐析法配合胃蛋白酶消化提取细胞内和培养液中胶原蛋白。分别选取0.05~0.2mM抗坏血酸、0.1~0.25mMβ-氨基丙腈（BAPN）、0.5~1.5mg/mL胃蛋白酶进行梯度实验，比较胶原蛋白提取效果。抗坏血酸作用时间2到5天，每间隔24小时取样一次。胃蛋白酶作用时间，分别为5小时、10小时和20小时三个时间点进行比对。结果：从细胞中和培养液中提取的胶原蛋白，最适的胃蛋白酶消化时间为5小时，作用浓度1mg/mL。培养液中抗坏血酸浓度在0.1~0.15mM之间，β-氨基丙腈浓度达到0.1mM时，连续培养96h以上胶原蛋白产出量较高。结论：实验初步说明，通过优化后的胶原蛋白提取方法，可有效提取患者原代成骨细胞及细胞培养液中的胶原蛋白，有助于成骨不全相关研究的继续深入。