欧洲禽源H1N1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 于海 刘晓敏 宫晓倩 张鹏 李泽君 汪琪 王林 童光志 阮宝阳
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 欧洲禽源H1N1猪流感病毒 重组蛋白 间接ELISA 特异性
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 页码范围: 13-19
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 4575字
• 语种: 中文

摘要

本研究利用原核表达并纯化的重组蛋白pCold TF-HA1作为包被抗原,建立欧洲禽源H1N1亚型猪流感病毒抗体的间接ELISA检测方法.通过反应条件的优化,确定了间接ELISA最佳工作条件:抗原最佳包被浓度为800 ng/孔,血清稀释度为1:200,封闭时间为1 h,一抗血清最佳作用时间为2 h,酶标二抗最佳稀释度为1:40000,二抗最佳作用时间为1 h,TMB显色时间为7 min.阴/阳性血清的判断结果分别为OD450≤0.255和OD450≥0.292,介于两者之间为可疑.符合性试验结果显示,建立的间接ELISA方法与血凝抑制(haemagglutination inhibition,HI)检测的阳性率分别为53.27%和49.53%,两者总复合率达96.27%.特异性试验结果显示,该方法与古典H1N1亚型和H3N2亚型猪流感阳性血清无交叉反应.通过重复性试验表明,同一批制备的重组蛋白包被96孔酶标板,检测OD450值的批内变异系数为1.97%~7.85%,批间变异系数为1.94%~6.93%.总之,本研究建立的禽源H1N1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA方法,具有敏感性较高、特异性强、重复性好的特点,为猪流感抗体检测提供了一种准确、快捷、简便、有效的技术手段,可用于禽源H1N1亚型猪流感抗体检测和流行病学调查.