欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的建立

• 作者: 于海 刘晓敏 单同领 周艳君 姚云 姜一峰 朱世强 李国新 杨海明 汪琪 汪秀会 王帅勇 童光志 童武 郑浩 高飞
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 病毒拯救 生长曲线 H1N1亚型
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 23-27
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 3049字
• 语种: 中文

摘要

为了构建猪流感病毒 A/swine/TianJin/6/2013(H1N1)的反向遗传操作技术平台,通过 RT- PCR技术分别扩增了欧洲类禽 H1N1亚型猪流感病毒的8个基因片段,并分别连接至双向转录表达载体 pBD上.纯化8个重组质粒,共转染到293T细胞.54 h后收集上清,并接种到MDCK细胞.待细胞病变明显时,进行血凝试验检测收集到的上清,测得血凝效价为1∶32.测定拯救病毒的全基因组序列,结果显示,在核苷酸序列上,拯救病毒与野生病毒完全一致.细胞病变情况显示,拯救毒株与野生毒株无明显差别.本研究成功拯救了欧洲类禽 H1N1亚型猪流感病毒,为猪流感病毒的致病机理、基因功能研究以及H1N1亚型猪流感病毒新型疫苗的研发奠定了基础.