可调控BMP-2表达的单质粒载体构建及其在ADSCs中的表达研究

• 作者: 方成 王鹏 胡永成 苗军 陈晓鹏
• 来源期刊: 天津医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白-2 基因调控 多西环素 脂肪基质干细胞 慢病毒表达载体
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 208-212
• 页数: 5页
• 分类号: R68
• 字数: 3993字
• 语种: 中文

摘要

目的:拟构建可调控骨形态发生蛋白(BMP-2)表达的单质粒慢病毒表达载体,为研究骨修复过程中的成骨性能打下基础.方法:通过基因重组技术获取含BMP-2的慢病毒表达载体,通过菌落PCR和基因测序鉴定;将慢病毒表达载体与包装载体pMD2.G和pSPAX在293T细胞中包装,收集病毒液,转染大鼠脂肪基质干细胞(ADSCs).首先,从细胞形态学和MTT来初步分析诱导剂多西环素(Dox)不同浓度对ADSCs活性的影响;其次,缩小Dox浓度范围,在荧光显微镜下通过荧光表达强度判断Dox对ADSCs中基因表达的诱导效率,相同条件下,qRT-PCR分析BMP-2的mRNA的相对表达量,进一步优化Dox的诱导浓度;最后,通过Western blot检测不同Dox浓度下,转染目的基因的ADSCs中BMP-2表达,Image J软件进行灰度值分析判断二者之间的剂量依赖关系.结果:1％琼脂糖凝胶电泳证实pUC57-BMP-2经双酶切后可获得大小约1 100 bp的目的基因片段,菌落PCR和基因测序证实含目的基因的慢病毒表达载体pLVCT-BMP-2构建成功.ADSCs对Dox最大耐受浓度为6μg/mL,Dox对ADSCs中目的基因表达的最大诱导浓度为5μg/mL,Western blot证实ADSCs中BMP-2表达与Dox浓度(0～5 μg/mL)存在剂量依赖关系.结论:成功构建可调控BMP-2表达的单质粒慢病毒表达载体,转染ADSCs后,BMP-2的表达与Dox浓度存在剂量依赖关系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗军	天津市天津医院骨科	57	395	11.0	17.0
2	胡永成	天津市天津医院骨科	96	859	15.0	26.0
3	王鹏	天津医科大学研究生院	41	99	5.0	7.0
4	方成	天津医科大学研究生院	3	3	1.0	1.0
5	陈晓鹏	天津医科大学研究生院	2	0	0.0	0.0