利用重组钝齿棒杆菌高效合成L-茶氨酸

• 作者: 和斐 唐蕾 张显 徐美娟 杨套伟 饶志明
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: L-茶氨酸 γ-谷氨酰转肽酶 钝齿棒杆菌 信号肽 批次流加
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1595-1605
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150620

摘要

[目的]构建Bacillus subtilis来源的γ-谷氨酰转肽酶蛋白(GGT)的Corynebacterium glutamicum SYPA5-5表达系统,验证该蛋白信号肽片段在宿主表达体系中的作用,并将该体系应用于高效合成茶氨酸的研究.[方法]将该ggt基因和切除信号肽的片段基因(△sp ggt)在C.glutamicum SYPA5-5中克隆表达.以C.glutamicum SYPA5-5高产L-精氨酸培养基为基础进行重组菌产酶优化.最优转化条件为:L-谷氨酰胺:乙胺为1:3,酶量为0.06 U/mL.采用底物流加策略高产L-茶氨酸,40 mL的转化体系包含:终浓度为0.9 U/mL的GGT,pH 10,37℃,从0h开始每隔2h补加20 mmol/L的L-谷氨酰胺,60 mmol/L的乙胺.[结果]C.glutamicumSYPA5-5/pXMJ 19-ggt发酵上清液中GGT酶活达到(4.69±0.34) U/mL,C.glutamicum SYPA5-5/pXMJ19-△sp ggt只检测到胞内酶活(0.99±0.17) U/mL,说明利用B.subtilis来源的信号肽可以实现GGT在C.glutamicum体系中分泌表达.最适产酶培养基条件为:葡萄糖浓度为10％;IPTG最适添加时间为0h.批次流加在12h时达到最大茶氨酸产量104.36 mmol/L,转化率为86.9％.[讨论]本文首次实现B.subtilis来源的γ-谷氨酰转肽酶基因(ggt)在C.glutamicum SYPA5-5中分泌表达,通过分批流加底物获得目前报道的利用重组C.glutamicum合成L-茶氨酸的最高产量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	饶志明	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	107	599	12.0	20.0
2	唐蕾	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	43	191	8.0	11.0
3	徐美娟	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	51	125	6.0	9.0
4	杨套伟	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	35	50	3.0	6.0
5	张显	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	42	98	6.0	9.0
6	和斐	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	1	2	1.0	1.0