大鼠ASC体外分离培养、鉴定及其双报告基因标记示踪

• 作者: 初梓超 张立剑 杨克科
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 脂肪来源的干细胞(ASC) 组织工程与再生医学 生物发光 复合酶解法
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 391-397
• 页数: 7页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.04.0067

摘要

[目的]探索ASC高效分离方法,采用荧光基因标记法对分离的ASC进行标记、功能检测和示踪研究.[方法]通过优化脂肪组织的酶解消化条件,分别采用胶原酶、胰蛋白酶及组合对脂肪组织消化,检测细胞产量,并用流式细胞术进行鉴定.之后利用GFP-Fluc双报告基因对体外分离培养的ASC进行标记,鉴定其多项分化潜能.[结果]胶原酶、胰蛋白酶复合酶消化能够显著提高ASC分离效率,细胞产量较单一酶消化提高4～5倍.体外扩增培养ASC以表达CD29、CD90等为主.GFP-Fluc基因标记后的ASCs具有成脂肪、成骨分化潜能,可用于活体干细胞移植后的定量追踪.[结论]胶原酶、胰蛋白酶复合酶解法可以显著提高脂肪干细胞的原代分离效率4～5倍.