为了探索cpxR基因对鼠伤寒沙门菌多重耐药性的调控机制,同时避免外排泵acrB的存在掩盖cpxR对其他外排泵或外膜蛋白的调控作用,利用基于Red同源重组系统的一步法失活染色体基因,用含有同源臂的线性打靶DNA片段替换目的基因,构建鼠伤寒沙门菌JS株的acrB基因缺失株JS△acrB.然后利用噬菌体转导技术,以前期构建的cpxR缺失株JS△cpxR∷kan为供体菌,本研究新构建的JS△acrB为受体菌,在P22噬菌体的作用下构建双基因缺失菌株JS△acrB△cpxR∷kan,同时制备cpxR基因回补菌株JS△acrB△cpxR∷kan/pcpxR.最后用微量稀释法测定10种临床常用代表性抗菌药物对JS和各缺失株的最小抑菌浓度(MIC).结果表明,成功构建鼠伤寒沙门菌的双基因缺失菌株JS△acrB△cpxR∷kan以及其cpxR基因互补菌株JS△acrB△c pxR/ pc pxR.MIC结果显示,acrB基因缺失后,多西环素、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢曲松和头孢噻呋的MIC值分别降低32、4、4、16、32、4、2和128倍;双基因缺失后,多西环素、庆大霉素、阿米卡星和头孢噻呋的MIC值进一步降低2、8、2和2倍;而将cpxR基因回补之后,这4种抗菌药物的MIC值会升高4、16、2和4倍.结果表明,cpxR能调控鼠伤寒沙门菌对多西环素、庆大霉素、阿米卡星和头孢噻呋的敏感性.