中华蜜蜂CREB基因的克隆及表达

• 作者: 张丽珍 曾志将 王子龙
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 中华蜜蜂 CREB基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 1599-1606
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.08.017

摘要

[目的]克隆中华蜜蜂(Apis cerana cerana)的cAMP反应原件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)基因全长cDNA序列,预测该基因及其编码蛋白的理化性质,并解析中华蜜蜂CREB在大脑中的表达特征,为研究该基因在中华蜜蜂学习记忆过程中的生物学功能提供基础.[方法]以中华蜜蜂为试验材料,解剖其大脑获得脑组织,提取大脑组织的总RNA.在此基础上,利用RT-PCR技术克隆中华蜜蜂大脑的CREB基因(AcCREB),然后用DNAstar软件中的Seqman程序将CREB正反向测序后的序列拼接获得CREB基因的cDNA序列,其氨基酸序列通过Bioedit软件按照六框翻译而成;用BLASTn和BLASTp进行序列比对分析;用ClustalX进行多重序列比对和同源性比较;用MEGA软件的邻接法(neighbor-joining)构建系统进化树,明确其系统进化关系.并通过SMART 数据库分析AcCREB的结构域.另外,将解剖好的蜜蜂大脑制成石蜡切片,并采用地高辛原位杂交技术分析AcCREB 在中华蜜蜂大脑中的分布表达情况.[结果]中华蜜蜂CREB基因的cDNA全序列全长890 bp,编码240个氨基酸残基,序列提交到GenBank(登录号为KC814690).其编码的蛋白预测分子质量为25.691 kD,等电点为5.82.结构域分析结果显示,该蛋白具有AA 89-131的PKID和AA 176-237的BRLA两个保守结构域.氨基酸序列比对结果显示,中华蜜蜂与西方蜜蜂、熊蜂、切叶蜂、大黄蜂、印度跳蚁、家蚕、埃及伊蚊、疟原虫、人类、小鼠10个物种的同源蛋白相似度分别为98.76％、98.35％、97.11％、94.09％、72.22％、58.97％、44.69％、41.69％、36.89％、36.89％.系统发育树显示该基因编码的蛋白质与西方蜜蜂的CREB亲 关系最近,与熊蜂、大黄蜂之间的亲 关系次之.另外,经过地高辛原位杂交技术处理后,在中蜂大脑蘑菇体的凯尼恩细胞、触角叶周围的细胞和大脑的髓质与小叶之间的细胞均有阳性着色,而且AcCREB在中华蜜蜂工蜂左右大脑的阳性着色不对称.[结论]AcCREB的氨基酸序列与西方蜜蜂、熊蜂、切叶蜂、大黄蜂高度同源,且基因在大脑中的分布暗示其可能参与了中华蜜蜂学习记忆过程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾志将	江西农业大学蜜蜂研究所	238	1129	15.0	18.0
2	张丽珍	江西农业大学蜜蜂研究所	17	53	5.0	6.0
3	王子龙	江西农业大学蜜蜂研究所	39	159	7.0	10.0