豆状带绦虫肌动蛋白基因克隆及其作为分子内参的应用

• 作者: 张少华 才学鹏 李雪强 骆学农
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 豆状带绦虫 肌动蛋白基因 序列分析 内参基因
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 32-37
• 分类号: R383.32
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆豆状带绦虫(Taenia pisiformis)肌动蛋白基因(Tp-actin)全长cDNA,分析其基因结构、系统进化及作为内参基因的适用性.方法 采用RT-PCR法扩增Tp-actin基因片段,RACE-PCR法获得3'和5'端cDNA序列,分别测序后拼接Tp-actin全长cDNA.利用生物信息学软件进行基因结构和系统进化分析.应用Primer Express软件设计Tp-actin和豆状带绦虫组织蛋白酶L样半胱氨酸蛋白酶基因(TpCP)的特异性引物,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测引物特异性和Tp-actin基因扩增效率,并以Tp-actin作为内参基因,分析TpCP在豆状带绦虫六钩蚴、囊尾蚴、成熟节片和孕节片等不同发育阶段组织中的表达特征.结果 测序结果显不,Tp-actin基因片段为1 048 bp,3 '和5'端基因片段分别为428和945 bp,与预期结果一致.拼接获得的Tp-actin全长cDNA为1 279 bp,其中3'UTR长118 bp,5'UTR长30 bp,开放阅读框为1 131 bp,序列已提交GenBank(登录号为JX624787).生物信息学分析结果显示,该序列编码376个氨基酸,推测蛋白相对分子质量(Mr)为41 749,等电点为5.29,含6种特定功能位点和3个actin蛋白家族特征位点.系统进化分析显示,Tp-actin序列与猪带绦虫(Taenia solium)和枝形裂头绦虫(Diphyllobothrium dendriticum)的同源性分别为100％和99.7％.qRT-PCR结果显示,Tp-actin和TpCP基因经特异性引物扩增,分别获得82和108 bp片段,与预期结果一致;Tp-actin和TpCP基因熔解曲线均呈单一信号峰,引物特异性强;Tp-actin基因标准曲线线性相关系数(R2)为0.999,符合qRT-PCR对扩增效率的要求;以Tp-actin基因为内参基因,TpCP基因在孕卵节片中相对转录水平比值为1.65,显著高于六钩蚴(1.00)、成熟节片(0.87)和囊尾蚴(0.62) (P＜0.05).结论 Tp-actin基因高度保守,可作为豆状带绦虫基因表达调控及量化分析的内标参照.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	骆学农	中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室	38	174	9.0	12.0
2	才学鹏	中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室	141	790	15.0	21.0
3	张少华	中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室	8	5	2.0	2.0
4	李雪强	中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室	2	2	1.0	1.0