淫羊藿次苷Ⅱ对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞中miR-181c及其靶基因KLF6、KLF9、KLF10和KLF15的表达影响研究

• 作者: 关瑞礼 唐渊 方冬 辛钟成 郑卫 雷洪恩
• 来源期刊: 中华临床医师杂志（电子版）
• 关键词: 淫羊藿次苷Ⅱ 内皮细胞功能障碍 miR-181c 晚期糖基化终产物 KLF TXNIP
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 页码范围: 56-61
• 页数: 6页
• 字数: 4712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2016.01.013

摘要

目的：检测淫羊藿次苷Ⅱ（ICAⅡ）对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞（HCECs）中miR-181c及其靶基因KLF6、KLF9、KLF10和KLF15的表达影响。方法经分离鉴定的原代HCECs，随机分为三组：正常＋BSA组（NC组）、AGE-BSA＋高糖组（DM组），ICAⅡ治疗组（DM＋ICAⅡ组）。蛋白印迹实验检测eNOS和RAGE蛋白水平；实时定量PCR检测miR-181c在模型中的表达差异；生物学信息网站预测miR-181c的靶基因；实时定量PCR检测对应靶基因在模型中的变化；蛋白印迹实验验证靶基因KLF6、KLF9及KLF6下游TXNIP蛋白表达水平差异。结果与NC组相比，蛋白印迹实验的DM组在AGE-BSA联合高糖刺激下，eNOS蛋白表达水平明显降低，而RAGE蛋白表达水平明显升高，表明成功构建用于模拟体内的糖尿病模型；而ICAⅡ干预后能够有效恢复eNOS和RAGE蛋白表达（P＜0.05）。与NC组相比，实时定量PCR检测结果发现糖尿病环境下miR-181c表达水平明显降低，而ICAⅡ治疗后可显著提高其表达水平（P＜0.05）；miR-181c的靶基因KLF6和KLF9在DM组明显升高（P＜0.05），而KLF10和KLF15的mRNA水平无显著差异（P＞0.05）；ICAⅡ干预后有效降低其KLF6和KLF9的mRNA表达水平（P＜0.05）。蛋白印迹实验结果进一步验证了KLF6和KLF9的蛋白水平变化，与上述的KLF6和KLF9的mRNA表达变化结果一致。另外，KLF6作用的下游TXNIP蛋白水平变化在模型下呈现和其一样的变化趋势。结论 AGE-BSA联合高糖刺激下miR-181c及其靶基因的显著表达差异揭示其参与内皮细胞损伤的发生发展，而ICAⅡ能够有效逆转上述变化，为进一步研究ICAⅡ与miR-181c信号通路具体的作用机制提供前期依据。