KLF9基因腺病毒载体的构建及其抗ROS功能

• 作者: 崔安芳 常永生 焦涛
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: KLF9 腺病毒 反应活性氧
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 762-766
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 3049字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建及鉴定KLF9基冈过表达的腺病毒载体,初步研究KLF9在对抗反应活性氧方面的功能.方法 克隆KLF9过表达质粒,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV,Pme Ⅰ酶切线性化,转化E.coli.BJ5183(含腺病毒载体pAdEasy-1)感受态细菌,产生重组腺病毒载体.重组载体经过卡那霉素抗性筛选和限制性内切酶分析确认重组后,再用Pac Ⅰ线性化重组质粒,回收,转染293A细胞,7～12d包装产生病毒颗粒.利用H2O2和过表达KLF9的腺病毒处理体外培养的C57 BL/6J小鼠原代肝脏细胞,实时定量PCR检测KLF9和抗ROS基因(CAT、SOD2和GPx1)的表达.结果 H2O2可以刺激C57BL/6J小鼠原代肝脏细胞KLF9和抗ROS基因的表达上调(P＜0.05).定量PCR以及Western blot结果显示成功包装过表达KLF9腺病毒,感染效率达90％以上.过表达KLF9可以上调抗ROS基因的表达水平(P＜0.05).结论 初步认定KLF9基因可参与C57 BL/6J小鼠原代肝脏细胞中抗ROS基因的调节.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常永生	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	11	29	4.0	5.0
2	焦涛	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	2	5	1.0	2.0
3	崔安芳	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0