小鼠气管平滑肌原代细胞的分离、培养与鉴定

• 作者: 刘庆华 叶致豪 彭勇波 沈金花 许文豪
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 气管平滑肌细胞 原代培养 组织块贴壁法 免疫荧光 MTT法 小鼠
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 364-368
• 页数: 5页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4061字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2016.04.006

摘要

目的：建立一种可靠的通过组织块贴壁法分离培养原代小鼠气管平滑肌细胞及免疫组化鉴定的方法。方法体视显微镜下立体分离小鼠气管平滑肌组织，组织块贴壁法培养原代细胞，对分离培养细胞通过免疫组化方法进行鉴定，并用MTT法对其增殖特性进行检测。结果从BALB／c雄性小鼠分离气管平滑肌组织，剪碎为1 mm3，用含1％青?链霉素的PBS及培养液漂洗，使组织块贴于培养皿底，并加入5 mL培养液，放入37℃、5％CO2的细胞培养箱培养，3～5 d后有明显梭状细胞从组织块爬出，5～6 d后，细胞可见明显“峰?谷”结构。经免疫荧光鉴定，在传代、纯化后，可得纯度为99％以上的气管平滑肌细胞。用MTT法测量其生长曲线。结论本方法操作简单、经济，获得的气管平滑肌细胞具有较好增殖能力，细胞数量和纯度能够满足后续细胞生物学实验研究的需要。