EGFR基因T790M突变COLD-PCR扩增体系的Tc值筛选

• 作者: 仇秦威 王倩 罗凯 贺智敏
• 来源期刊: 检验医学与临床
• 关键词: 表皮生长因子受体基因 Tc值 低变性温度下的复合聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1328-1330,1333
• 页数: 4页
• 字数: 4627字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9455.2016.10.011

摘要

目的 筛选表皮生长因子受体(EGFR)基因T790M突变PCR扩增体系的Tc值并初步建立具T790M突变富集效果的低变性温度下的复合聚合酶链反应(COLD-PCR)体系,同时探讨Tc值的筛选策略以及注意事项.方法 以肺癌MSTO-211H、NCI-H1975细胞为T790M突变野生型和突变型标准样品,通过目标片段关键变性温度筛选实验、COLD-PCR反应模式比较实验以及Tc值的验证实验,确定COLD-PCR体系的Tc值并初步验证其效果.结果 本实验体系T790M突变的目的扩增片段关键变性温度低于野生型片段,据此体系反应模式选择为快速COLD-PCR反应模式,同时确定Tc值为89.6℃,验证实验显示本体系可检出1％的T790M突变,较常规PCR提高5倍.至此T790M突变富集COLD-PCR扩增体系已成功建立.结论 成功完成体系Tc值的筛选并建立T790M突变富集COLD-PCR扩增体系.