镁螯合酶CHLI和CHLD亚基的表达纯化及其稳定复合体的鉴定

• 作者: 刘扬 崔香淑 张星亮 彭熹 邓翔
• 来源期刊: 沈阳农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: CHLI CHLD 原核表达及纯化 蛋白复合物
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 283-290
• 页数: 8页
• 分类号: S511
• 字数: 6142字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1700.2016.03.005

摘要

为明确植物光合作用中镁离子螯合酶CHLI与CHLD亚基形成复合物CHLI-CHLD这一重要过程的机制,首先需要获得可溶性CHLI和CHLD蛋白并确定其复合体装配。通过分子克隆技术构建截断的CHLI和CHLD重组体表达质粒。将其分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。通过Ni琼脂糖树脂(Ni sepharose 6 Fast Flow)和谷胱甘肽琼脂糖树脂(Glutathionsepharose 4 Fast Flow)亲和层析纯化可溶性重组蛋白。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和TEV酶切试验验证目标蛋白。采用GST-Pulldown试验鉴定CHLI与CHLD的相互作用。通过凝胶过滤层析和SDS-PAGE测定复合体中CHLI与CHLD蛋白的比例。结果表明：成功构建了截断的CHLI和CHLD重组体表达质粒pET-28a-CHLI (13-357),pET-28a-CHLD (20-676)及pGEX-4T-2-CHLD (20-767)；在18℃,0.2mmol?L-1 IPTG条件下诱导16h后,成功获得了可溶性的CHLI (13-357),CHLD (20-676)和GST-CHLD (20-676)重组表达蛋白；CHLI与CHLD存在直接相互作用且需要Mg2+和ATP；稳定复合体CHLI-CHLD的亚基比例为1︰1。综上表明原核表达及纯化镁离子螯合酶CHLI与CHLD亚基蛋白,在Mg2+和ATP存在的条件下通过凝胶过滤层析可获得1︰1的稳定复合体CHLI-CHLD。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘扬	中国农业大学农业生物技术国家重点实验室	10	48	5.0	6.0
2	崔香淑	延边大学医学部护理学院	80	135	6.0	10.0
3	张星亮	广东医学院附属医院儿科	8	43	2.0	6.0
4	彭熹	广东医学院附属医院儿科	2	6	2.0	2.0
5	邓翔	广东医学院附属医院儿科	1	2	1.0	1.0