兔Oddi氏括约肌细胞BK 通道Alpha亚基在Pichia酵母中的高效表达、纯化和鉴定

• 作者: 张孝勇 樊建勇 沈柱 王亚蓉 王秦芳 魏经国
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: Pichia酵母 BK 通道Alpha亚基 分泌表达
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 212-215
• 页数: 4页
• 分类号: R392.111
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2005.03.004

摘要

目的用巴斯德毕赤酵母系统表达兔Oddi氏括约肌(SO)细胞BK 通道α亚基,并进行纯化和鉴定.方法采用RT-PCR扩增编码兔SO细胞BK通道α亚基B细胞表位区基因的cDNA,经测序正确将其克隆入酵母表达载体pPIC9K,以电穿孔法转化酵母GS115.经MD平板筛选重组子、G418筛选鉴定后,甲醇诱导表达,镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化,进行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果用RT-PCR扩增出约1 497 bp的兔SO细胞BK通道α亚基基因的cDNA.序列分析显示,扩增序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道α亚基的cDNA序列完全一致.SDS-PAGE显示本系统表达的α亚基融合蛋白Mr约为55 000,表达量约为55 mg/L,纯度为96%.Western blot检测证明,该α亚基融合蛋白可与兔BK 通道α亚基多克隆抗体特异性结合.结论克隆了编码兔SO细胞BK通道α亚基B细胞表位区基因的cDNA,并在毕赤酵母中成功地表达了该蛋白,为进一步研究BK通道提供了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏经国	第四军医大学唐都医院放射科	77	429	12.0	15.0
2	王亚蓉	第四军医大学唐都医院放射科	55	233	8.0	10.0
3	沈柱	第四军医大学唐都医院皮肤科	49	214	9.0	11.0
4	樊建勇	第四军医大学唐都医院皮肤科	10	78	4.0	8.0
5	张孝勇	第四军医大学唐都医院放射科	6	13	2.0	3.0
6	王秦芳	第四军医大学口腔医院检验科	7	54	2.0	7.0